Clonación y expresión de CD163 porcino: aplicación en la caracterización de anticuerpos monoclonales frente a CD163 porcino, y desarrollo de un ELISA para cuantificar CD163 soluble en fluidos biológicos

Resumen

CD163 es un miembro de la familia de proteínas con dominios de receptores "scavenger" ricos en cisteína, con una expresión restringida a células del linaje monocítico. Se ha demostrado su función como receptor de complejos hemoglobina/ haptoglobina, y se le ha implicado en la regulación de procesos inflamatorios. El tratamiento de monocitos/ macrófagos con ésteres de forbol, LPS, o mediante entrecruzamiento de receptores Fc gamma, provoca la liberación de CD163 de la superficie celular por un mecanismo dependiente de proteasas. La cantidad de CD163 soluble (sCD163) en suero y otros fluidos corporales se considera un indicador de la activación de los macrófagos. Recientemente, nuestro grupo demostró que CD163 está implicado en la infección de monocitos/macrófagos porcinos por el virus de la peste porcina africana. En este trabajo se describe la clonación del cDNA de CD163 porcino, y su expresión en células CHO transfectadas. Se obtuvieron clones de células CHO transfectadas que expresan de forma estable la molécula CD163 porcina, y se utilizaron para caracterizar tres nuevos anticuerpos monoclonales que reconocen específicamente CD163 porcino. El uso de dos de estos anticuerpos, que reconocen epítopos diferentes en CD163 porcino, ha permitido desarrollar un ensayo inmunoenzimático (ELISA) para medir la cantidad de sCD163. El ensayo se calibró con lisados de las células transfectadas que expresan CD163 porcino, mostrando una sensibilidad equivalente a 10E5 células/mL, suficiente para detectar la presencia de sCD163 en suero y sobrenadantes de cultivo de macrófagos alveolares activados. Este ensayo será de utilidad para determinar el grado de activación de los macrófagos porcinos en procesos inflamatorios y enfermedades infecciosas porcinas.