Contexto de AUG y traducción de mRNA en el virus vaccinia

Resumen

En este estudio hemos examinado el papel de los nucleótidos próximos al AUG iniciador en la modulación de la traducción en genes del virus vaccinia. En primer lugar, hemos analizado la secuencia alrededor de los codones de iniciación en la secuencia genómica de vaccinia. En este análisis se detectó una preferencia por A en la posición 3, y por A ó G en la posición +4, relativa a la A en el codon de iniciación. Estos resultados coinciden en términos generales con las secuencias conocidas para la traducción óptima de mRNAs eucarióticos. Los nucleótidos 3 y +4, que afectan a la eficiencia de traducción de mRNAs celulares en un rango de hasta 20 veces, fueron examinados por mutagénesis dirigida y ensayos funcionales en el contexto de células infectadas por vaccinia. Hemos generado una colección de virus recombinantes que expresan beta-galactosidasa (beta-Gal) bajo el control de un promotor fuerte, y conteniendo todas las posibles sustituciones en esas posiciones. La cuantificación del mRNA de beta-Gal, y de la actividad beta-Gal, mostró que la eficiencia de traducción no se alteraba significativamente por las sustituciones nucleotídicas en las posiciones 3 y +4. Por tanto, a pesar de la alta frecuencia de nucleótidos de purina en esas posiciones en los mRNAs de vaccinia, no se detectó efecto de dichas posiciones en condiciones en las que la â-Gal era sobreexpresada.