Desarrollo y evaluación de un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Herpesvirus bovino 1

Resumen

Se ha desarrollado y evaluado un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Este se basó en la amplificación de una porción del gen de la timidina quinasa (tk) viral, para lo cual se ensayaron un nuevo par de cebadores y diferentes condiciones de la PCR. Bajo condiciones óptimas, no se observó amplificación de herpesvirus heterologos u otros virus bovinos. Sin embargo, se obtuvo una banda de 202 pb lo que confirma la especificidad del ensayo. Una sensibilidad analítica de 0.15 DICT50 por reacción permitió la detección de BoHV-1 en sobrenadantes de exudado nasal hasta 11 días después de la infección experimental de bovinos. Hubo un 100% de concordancia entre resultados hasta el día siete post-infección cuando la PCR fue comparada con el aislamiento viral y la prueba de anticuerpos fluorescentes (FAT). Desde el día ocho post-infección y hasta el final del experimento la mayoría de las muestras positivas se obtuvieron por PCR. Esta estrategia de PCR simple no usa co-solventes con el propósito de eliminar productos no específicos o incrementar la eficiencia de la amplificación, provee un método rápido para el diagnóstico de las enfermedades de BoHV-1 en contraste con el semi-nested o nested PCR con más consumo de tiempo y altas posibilidades de contaminación, además, puede ser fácilmente usada en todos los laboratorios de diagnostico.